扶芳藤對兔心肌缺血再灌注損傷血清SOD MDA的影響

扶芳藤對兔心肌缺血再灌注損傷血清SOD、MDA的影響

李成林 王慶高 廣西中醫學院第一附屬醫院

530022 南寧市東葛路89-9號

崔勝利 廣西中醫學院

2008級碩士研究生 530001

摘 要 目的：觀察扶芳藤對兔心肌缺血再灌注損傷自由基的影響。 方法：將48只健康家兔隨機分為假手術組(A組)、缺血再灌注模型組(B組)、卡托普利對照組(C組)、扶芳藤大劑量組(3.6 g/kg)(D組)、扶芳藤中劑量組(1.8 g/kg)(E組)、扶芳藤小劑量組(0.9 g/kg)(F組)，每組8只。 采用黃嘌呤氧化酶法測定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性，用硫代巴比妥酸法測丙二醛(MDA)含量。

結果：模型組在缺血30 min及再灌注后SOD的活性顯著降低，MDA含量明顯增加，與假手術組比較有顯著性差異(P<0.01);與模型組比較，用藥各組在相應時段均有明顯降低MDA含量及提高SOD活力的作用(P<0.01);其中扶芳藤大劑量作用優于卡托普利組(P<0.01或P<0.05)，中劑量組與卡托普利作用相當(P>0.05)。

結論：扶芳藤通過清除氧自由基，抑制了脂質體的氧化，從而對心肌缺血再灌注損傷起到了保護作用，尤其以扶芳藤大劑量組表現更為明顯。

關鍵詞 扶芳藤;心肌缺血再灌注損傷;超氧化物歧化酶(SOD);丙二醛(MDA)

扶芳藤Evonymus fortunei E-and.-mazz.為衛矛科植物扶芳藤的莖葉，具有舒筋活絡、止血瘀的功效[1]。近年來有研究指出，扶芳藤有較強的抗氧化作用，具有防治腦缺血相關疾病的作用[2]，對心血管有良好的藥理作用[3]。臨床上其復方制劑復方扶芳藤合劑(原名百年樂)作為防治老年心血管疾病的輔助治療藥物已被廣泛應用。

本課題之前已報道了扶芳藤通過減少Bax蛋白的表達，升高Bcl-2，抑制再灌注心肌細胞凋亡，從而對心肌缺血再灌注損傷(I/R)起到保護作用[4]。本實驗進一步觀察了扶芳藤對家兔心肌缺血再灌注模型血清中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)等指標的影響，從另一角度探討其對心肌缺血再灌注損傷保護作用的機制，現報道如下。

1 材料與儀器

1.1 扶芳藤水煎液的制備

扶芳藤干燥莖葉由廣西中醫學院制藥廠提供，并經該廠質檢科鑒定。取扶芳藤2 kg切碎，加入適量蒸餾水，煎煮2次，第一次煎煮2 h，第二次煎煮1 h，將2次煎煮的藥液合并在一起，過濾(200目篩網)后濃縮至200 ml，制成含生藥10 g/ml的藥液。

1.2 藥品

卡托普利，由江蘇常州制藥廠生產，批準文號：國藥準字H32023731。

1.3試劑儀器

SOD及MDA試劑盒(購自南京建成生物工程研究所);TU 1901紫外分光光度計上海棱普儀器儀表有限公司);SSW-420-2S電熱恒溫水浴箱(上海博迅實業有限公司);PRO200組織勻漿器(美國);泰盟科技BL-410生物機能實驗系統;泰盟科技HX-300S動

物呼吸機;北京醫用離心機制造LDZ4-0.8自動平衡微型離心機。

1.4 動物

新西蘭大白兔，雌雄不限，雌無孕，體重2.5～3 kg，由廣西醫科大學動物實驗中心提供。

2 實驗方法

2.1 動物分組與給藥

實驗動物按查隨機數字表法隨機分為A、B、C、D、E、F6組，每組8只。A為假手術組，B為模型組，C為卡托普利對照組(10 mg/kg)，D為扶芳藤大劑量組(3.6 g/kg)，E為扶芳中劑量組(1.8 g/kg)，F為扶芳藤小劑量組(0.9 g/kg)。分籠飼養，自由飲食，于每天早上點灌胃給藥，假手術組和模型組予蒸餾水灌胃。劑量是根據成人每日臨床用量按人與動物之

間藥物劑量換算而成[5]。給藥7 d，末次給藥1 h后進行實驗。

2.2 心肌缺血再灌注損傷模型的制備[6]

予20%烏拉坦5 ml/kg經耳緣靜脈注射麻醉后，背位固定，氣管切開，連接微型人工呼吸機(潮氣量21 ml，頻率30～40次/分)。沿胸骨左緣第2～4肋間開胸，暴露心臟，剪開心包膜，用小棉球將心臟向右邊輕推，在左心耳與肺動脈圓錐之間找到與左冠狀動脈伴行的心大靜脈，用止血鉗輕輕提起左心耳，于左心耳下方用醫用眼科針，3/0號絲線穿線，將一細小醫用硅膠管(直徑約2 mm) 墊于血管與結扎線之間，連同心大靜脈一起結扎冠狀動脈左前降支，深度約2 mm，盡量減少對心肌的創傷。結扎40 min后剪線松開行再灌注40 min。以結扎后心電圖ST段弓背樣抬高>0.1 mV以上，同時左室前壁紫紺作為判定缺血成功的

標準;松開結扎線后20 min內ST段下降>1/2幅度，左室前壁缺血區紫紺消失作為再灌注成功的標準。假手術組只穿線不結扎，余操作同上。

2.3 血清中SOD，MDA的檢測

分別于缺血前、缺血后30 min、再灌注后30 min、再灌注后120 min自兔頸總動脈采血4 ml，各時點血液1500 rpm離心10 min，分離血清。采用黃嘌呤氧化酶法測血清超氧化物歧化酶(SOD)活性，用硫代巴比妥酸法測丙二醛(MDA)含量，操作按照試劑盒說明書進行。

2.4統計學處理

計量資料用均數±標準差(x±s)表示，多組間比較用方差分析，組間比較用q檢驗。全

部數據采用SPSS12.0統計軟件分析。

3 實驗結果

3.1 各組血清 SOD 活性的測定

由表1可以看出：缺血前各組實驗動物血清SOD活力沒有顯著性差異(P>0.05)。假手術對照組血清SOD活性在實驗過程中的變化無明顯統計學意義(P>0.05)。模型組血清SOD活性于缺血30 min出現明顯下降，與假手術對照組比較差異有顯著性意義(P<0.01);再灌注發生后，再灌注30min、再灌注120min兩個時段血清SOD活性與缺血30min時相比均降低，其中以缺血再灌注120 min時降低最為明顯，表明再灌注進一步降低了血清SOD活性。與模型組比較，3個時間觀測點各用藥組的血清SOD活性均明顯升高(P<0.01)。與卡托普利對照組比較，扶芳藤大劑量組在3個時間觀測點均能明顯升高血清SOD的活性(P<0.01);中劑量組血清SOD活性與卡托普利組比較，無顯著性差異(P>0.05)。

3.2各組血清MDA含量的測定

由表2可以看出：缺血前各組實驗動物血清MDA含量沒有顯著性差異(P>0.05);假手術組血清MDA的含量在實驗過程中變化不明顯;模型組血清MDA含量于缺血30 min出現明顯升高(P<0.01);再灌注發生后MDA含量逐漸升高，其中以缺血再灌注120 min時升高最為明顯，說明再灌注進一步升高了血清中MDA的含量。與模型組比較，在3個時間觀測點各用藥組血清MDA含量均明顯降低(P<0.01)。與卡托普利對照組比較，扶芳藤大劑量組在3個時間觀測點的血清MDA含量均顯著下降(P<0.05或P<0.01);中劑量組血清MDA含量與卡托普利組比較，無顯著性差異(P>0.05)。

4 討 論

扶芳藤入藥首載于《本草拾遺》“扶芳藤，味苦，小溫，無毒，主一切血，一切氣，一切冷，去百病，久服延年，變白，不老……大主風血”，可用于治療風濕痹痛、腰肌勞損、吐血、血崩、創傷出血、月經不調、血瘀閉經、跌打骨折等癥，主要以莖葉入藥，全年可采，屬廣西民間草藥。

前期研究結果表明，扶芳藤具有良好的心血管藥理作用，可延長小鼠心肌缺血的存活時間，抑制血栓形成，改善去甲腎上腺素(NA) 所致的腸系膜微循環障礙，并可擴張氧耳廓微血管[3]，具有擴張血管平滑肌和降血壓作用[7]。心肌缺血再灌注損傷的機制普遍認為與心肌的能量代謝障礙、氧自由基的大量產生、細胞內鈣離子的超載、血管內皮細胞分泌的一系列內皮因子等因素有關。氧自由基的大量產生使心肌組織的脂質體(LPO)增多，心肌組織丙二醛(MDA)的含量增加，從而引起心肌細胞膜結構的改變，心肌細胞受到損傷。因此，MDA是反映心肌氧自由基損傷的直接指標，而SOD是清除氧自由基的重要酶類，可減輕氧自由基對心肌細胞的損傷作用。

本研究結果顯示，心肌缺血30 min后模型組實驗動物血清SOD活性較假手術組明顯降低，MDA明顯增高;隨著再灌注的發生和發展，SOD活性較缺血期降低更顯著，MDA進一步增高，說明缺血再灌注加劇了心肌的損傷。與模型組比較，C，D，E，F組在相應時段均有明顯降低MDA含量及提高SOD活力的作用(P<0.01);其中扶芳藤大劑量作用優于卡托普利(P<0.01或P<0.05)，而中劑量與卡托普利作用相當(P>0.05)。

結果表明，扶芳藤可通過提高SOD的活性，降低氧自由基的產生，抑制了脂質體的過氧化，從而對心肌缺血再灌注損傷起到了保護作用，此作用以扶芳藤大劑量組最為明顯。